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微波在肾活检组织染色中的应用

来源:论文汇编 作者:自动采集 2005-1-1
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摘要: 肾活检组织病理(光镜)检查在肾活检病理诊断中具有重要价值,通过特殊染色可以显现标本中特殊的物质如基底膜、免疫复合物等,然而,常规的特殊染色制作比较费时,尤其是过碘酸六胺银(Periodic Acid-Silver Methenamine,PASM)染色,控制不好往往失败。我们将微波辐射技术应用于肾活检组织的过碘酸Schiff反应(Periodic ......



  肾活检组织病理(光镜)检查在肾活检病理诊断中具有重要价值,通过特殊染色可以显现标本中特殊的物质如基底膜、免疫复合物等,然而,常规的特殊染色制作比较费时,尤其是过碘酸六胺银(Periodic Acid-Silver Methenamine,PASM)染色,控制不好往往失败。我们将微波辐射技术应用于肾活检组织的过碘酸Schiff反应(Periodic Acid-Schiff Reaction,PAS)及PASM染色中,证明具有快速省时,染色效果好,不易脱片等优点,现介绍如下:

  1 材料和方法

  1.1 材料 肾组织(肾穿刺获得),58℃纯净石蜡;松下NN-5208型微波炉(输出功率600W)。

  1.2 试剂

  1.2.1 Schiff液:同常规Schiff液配制。

  1.2.2 环六亚甲基四胺-硝酸银液(贮备液):

  5%硝酸银20.0ml

  3%环六亚甲基四胺液400.0ml

  环六亚甲基四胺-硝酸银液(工作液):

  环六亚甲基四胺-硝酸银液(贮备液)45.0ml,5%硼砂液5.0ml

  1.2.3 混合红染液:

  变色酸2R(chicmolocps 2R) 0.6g

  亮绿SF           0.3g

  蒸馏水           100ml

  磷钨酸           0.8g

  冰醋酸           1.0ml

  1%酸性品红   少许(需染片后确定)

  1.3 方法

  1.3.1 制片 肾穿刺组织经升汞-苦味酸混合固定液固定后,常规酒精脱水、氯仿透明、石蜡浸透、包埋,切片厚2μm。

  1.3.2 染色

  (1)PAS染色[1]:①染色前将切片置微波辐射,中档2~3min,再入70~80℃烤箱中5min,常规脱蜡入水;②切片入0.5%过碘酸液,放入带气孔的塑料染色缸中置微波高档30s;③蒸馏水轻洗,入Schiff液中,置微波炉中档30s;④流水冲洗10min(切片转为玫瑰红色);④蒸馏水轻洗切片,苏木素复染30s~2min,水洗兰化(必要时以1%盐酸酒精分化);⑤常规脱水、透明、封片。

  (2)PASM染色:①同PAS法的步骤①;②切片入30%含碘(3%)酒精5min以脱汞,蒸馏水洗,入5%硫代硫酸钠5min以脱碘;③蒸馏水洗,入1%过碘酸氧化15min(室温);④蒸馏水洗,入环六亚甲基四胺-硝酸银工作液,微波中档1min左右(染色过程镜下控制,可在温蒸馏水中轻洗切片以便光镜下检查);⑤蒸馏水轻洗(如银过染,则室温下以0.25%的氯化金调色10s),入3%的硫代硫酸钠溶液中数秒~2min;⑥蒸馏水轻洗,1%醋酸中过一下,入混合红液20min,1%醋酸水洗,入1%亮绿液,镜下控制,快速脱水(甩片);⑦常规透明、封片。

  2 结 果

  PAS染色:基底膜、系膜基质、纤维蛋白、血管透明变性(玻璃样)、淀粉样物质等可显示阳性反应,呈紫红色。

  PASM染色:基底膜及系膜基质呈棕黑色,免疫复合物呈红色。

  与常规法相比组织切片颜色鲜艳,背景清晰。

  3 讨 论

  微波是一种高频电磁波,近来已成功地应用于光镜、电镜及免疫学的研究,特别是在组织固定、脱水及免疫组织化学技术中的应用已日益广泛[2~6]。我们采用微波辐射技术与常规PAS、PASM染色相结合的方法,在肾活检组织的特殊染色中也取得了良好的效果。与常规法相比,微波染色具有以下优点:①防止脱片。肾组织特殊染色时切片常易脱落,特别在PASM染色时,因银染时间过长常导致组织掉片,造成制片失败。采用微波辐射技术进行烤片,则可避免此类现象的发生;②标本制备时间缩短,包括烤片及染色时间。采用微波技术后,烤片时间可由40min缩短至7min左右;由于微波辐射使分子运动速度加快,产生大量的热,促进组织内试剂的扩散,从而使染色时间也缩短,PAS染色可缩短20min左右,PASM染色则将时间缩短了40min左右;③改进染色效果。经微波辐射染色的组织切片背景十分清晰,颜色鲜艳,且易着色。总之,微波辐射用于肾组织特殊染色具有快速简便、染色效果好、背景清晰、不易脱片等优点,易于推广应用。

  实践中我们体会到制片过程中需注意以下几点:①Schiff液用于PAS微波染色后应丢弃;②环六亚甲基四胺-硝酸银(贮备液)应贮存在4℃冰箱中,最多保留一星期,工作液应新鲜配制,并在使用前混合;③如银过染可用氯化金调色,氯化金溶液可反复使用,贮存于4℃冰箱;④采用耐微波的塑料染色缸,盖子上留有一小孔,入微波炉时将盖子拧松,以防密封使染色缸爆炸。

  参考文献

  1 Brinn NT.Rapid metallic histolog ical staining using the microwave oven.J Histotechnol,1983,6:125

  2 徐光鼎.微波技术在石蜡病理组织块制备中的应用.中华病理学杂志,1988, 17:110

  3 Mayers CP.Histological fixation by mic rowave heating.J Clin Pathol,1970,23:273

  4 Leong AS,Daymon ME,Milios J et al.M icrowave irradiati on as a form of fixation for light and e lectron microscopy.J Pathol,1985,146:313

  5 Boon ME,Kok LP,Ouwerkerk NE et al.Mic rowave-stimulated diffusion for fast processing of tissue:R educed dehydrating,clearing and impregnating times.Histopathology,1986,10:303

  6 马大烈,詹溶洲,黄 玲.快速微波免疫组织化学染色技术.中华病理学杂志,1992,21(1):56

 


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