当前位置:首页 > 合作平台 > 医学论文 > 基础医学论文 > 生理学 > 一氧化氮及其合酶在杀伤肿瘤细胞中的作用

一氧化氮及其合酶在杀伤肿瘤细胞中的作用

来源:第二军医大学学报 作者:白冲韩一平刘忠令张世明 2004-9-27
336*280 ads

摘要: 活化的巨噬细胞(M)在抗肿瘤过程中具有十分重要的意义。一氧化氮(NO)作为活化的M的细胞毒效应分子之一,在杀伤肿瘤效应中起重要作用[1]。本研究通过测定肺M内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物NO水平,并应用特异性NOS抑制剂来观察肺M对肿瘤细胞杀伤作用的影响,旨在探讨肺M NOS活性与肿瘤杀伤力之间的关系,以阐明肺......


  活化的巨噬细胞(M)在抗肿瘤过程中具有十分重要的意义。一氧化氮(NO)作为活化的M的细胞毒效应分子之一,在杀伤肿瘤效应中起重要作用[1]。本研究通过测定肺M内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物NO水平,并应用特异性NOS抑制剂来观察肺M对肿瘤细胞杀伤作用的影响,旨在探讨肺M NOS活性与肿瘤杀伤力之间的关系,以阐明肺M在抗肿瘤免疫中的地位。

  1 材料和方法

  1.1 肺M的制备及培养 体质量20~25 g的纯种C57雄性小鼠32只,购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司,随机分成实验组和对照组,每组16只,均经腹腔注入2%戊巴比妥钠麻醉,腹主动脉放血处死,暴露颈部气管后,用37℃生理盐水进行支气管肺泡灌洗,每次1 ml,共15次。将回收的灌洗液以1 500 r/min离心10 min,弃上清,用含10%小牛血清的最低必需培养液(MEM)配成 1×106个/ml的细胞悬液。将细胞悬液接种于96孔板中,37℃,5% CO2培养2 h,洗去未贴壁细胞,根据需要分别加入不同剂量(50,100,150,200 U/ml)的干扰素γ(INFγ),继续培养24 h。

  1.2 肿瘤细胞培养上清液的收集 将无菌取得的肥大细胞肿瘤细胞 P815 (上海肿瘤研究所提供)以 5×105个/ml的密度培养在RPMI 1640培养液中,置37℃,5% CO2培养箱培养48 h, 2 500 r/min离心20 min,取上清液,置-20℃保存待用。

  1.3 iNOS活性测定 用Smith薄层层析法[2]测定上清液培养标本中瓜氨酸 (citrulline)的生成量,以此反映iNOS的活性。

  1.4 NO测定 10 mmol/L硼酸钠溶液系列稀释10 mmol/L亚硝酸钠,测定其相应于波长为545 nm时的光密度(D)值,作曲线,并得出直线回归方程式[3]。取上清培养液,加入等量的Greiss试剂(1%磺胺、0.1%萘乙二胺、2.5%磷酸),室温放置10 min,545 nm比色,根据直线回归方程计算出NO含量。

  1.5 肺M肿瘤杀伤活性测定 在培养板内加入肺M悬液 100 μl/孔,实验组再加入2 mmol/L NG单甲基左旋精氨酸(L-NMMA,Sigma公司),50 μl/孔,置37℃,5% CO2培养箱培养 4 h,再加入含10% P815上清液的营养液 100 μl/孔,置37℃,5%CO2培养72 h。每孔加二甲基亚砜(DMSO) 100 μl,混匀静置20 min,在PG-3022酶联仪上用570 nm波长测定D值,计算肿瘤细胞生长抑制率。

  1.6 统计学处理 所有数据采用X±s表示,组间显著性检验用配对资料t检验,各指标进行直线相关分析。

  2 结果

  2.1 不同剂量INFγ对肺M产生NO的影响 不同剂量的 INFγ与活化的肺M共同培养24 h后,培养液中NO含量随着INFγ剂量的增加而升高(图1),且呈明显的剂量依赖关系(r=0.985,t=19.89,P<0.01)。

 

图1 INFγ对肺巨噬细胞NO产生和iNOS活性的影响

  fig 1 The effect of INFγ on NO production and

  activity of iNOS by macrophages

  ●: NO; ▲: iNOS

  2.2 INFγ对肺M NOS活性的影响 不同剂量INFγ作用于肺M后,肺M iNOS活性随INFγ剂量的增加而升高(图1),与INFγ的剂量有明显的相关性(r=0.990, t=19.78,P<0.01)。


医学百科App—医学基础知识学习工具


页:[1] [2] [3] [下一页] 
返回顶部】【打印本文】【放入收藏夹】【收藏到新浪】【发布评论



察看关于《一氧化氮及其合酶在杀伤肿瘤细胞中的作用》的讨论


关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容
联系Email: