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丙型肝炎患者肝组织免疫组织化学研究

来源:中华流行病学杂志 作者:陈宪锐玄梅香尹燕明李莉魏佑农赵新平 2004-9-27
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摘要: 摘要:目的研究丙型肝炎(丙肝)病毒(HCV)抗原在丙肝患者肝组织中的分布状况及其相互关系。方法采 取免疫组织化学方法,用多克隆抗-HCV和单克隆抗-HCV-NS3、抗-HCV-NS5,对107例丙肝患 者肝组织中HCV抗原进行检测。结果应用3种抗体均从丙肝患者肝 组织中检出相应抗原,检出率分别为38。HCV-NS3的表达与炎症反应无明显解......


  摘 要:目的 研究丙型肝炎(丙肝)病毒(HCV)抗原在丙肝患者肝组织中的分布状况及其相互关系。方法 采 取免疫组织化学方法,用多克隆抗-HCV和单克隆抗-HCV-NS3、抗-HCV-NS5,对107例丙肝患 者肝组织中HCV抗原进行检测。结果 应用3种抗体均从丙肝患者肝 组织中检出相应抗原,检出率分别为38.3%、28.0%和52.3%;阳性颗粒定位于肝细胞浆; 阳性细胞分布呈散在、弥漫状和簇状;HCV-NS3的表达与炎症反应无明显解剖学关系,HCV -NS5阳性细胞较常见位于炎症灶旁或灶中。结论 HCV各成分在肝组 织中的表达水平存在差别;HCV-NS5的表达可能与丙型肝炎的发病机理有关。

Immunohistochemical findings on liver tissue in patients with hepatitis C

CHEN Xianrui XUAN Meixiang YIN Yanming,et al.

  (Taishan Medical College, Taian 271000, China)

  Abstract:Objective To investigate the distributions and infer relations of HCV antigens in the liver tissues.Methods Immunohistochemical techniques as polyclonal anti body to HCV, monoclonal antibody to HCV-NS3 and monoclonal antibody to HCV-NS5 were used to detect HCV antigens in 107 patients with hepatitis C.Results HCV antigens in liver tissues were identified on these three kinds of an tibodies. The positive rates were 38.3%,28.0% and 52.3% respectively. The positi ve granules were located in the cytoplasma of liver cells. The distributions of positive cells were scattered, diffusive and clustered. No obvious anatomic association was observed between the expression of HCV-NS3 and inflammatory reac tion. HCV-NS5 positive cells were more commonly seen around or in the flammatory focci . Conclusion The expressions of various components of HCV were demonstrated in different concentrations. The expressions of HCV-NS5 might be related to the pathogenesis of hepatitis C.

  Key words:HCV; HCV-NS3; HCV-NS5; Immunohistochemistry

  丙型肝炎病毒(HCV)是输血后肝炎的重要病原,为单股正链RNA,长约9 400 bp。HCV的急性感染易慢性化,大约50%发展为慢性肝 炎,至少20%发展为肝硬化。到目前为止,对HCV的致病机制了解较少,为了解HCV抗原在患 者肝组织中的分布及其相互关系,本研究应用免疫组织化学技术,用针对HCV抗原的多种抗 体,对107例丙型肝炎患者肝组织进行了HCV抗原检测,现报告如下。

  对象与方法

  一、研究对象

  107例丙型肝炎患者均为住院治疗者,其中男84例,女23例,平均年龄46.6岁,全部病例均有组织学诊断依据,按照1995年(北京)第五次全国传染病寄生虫学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准进行诊断和分型,其中急性肝炎19例,慢性肝炎64例,肝硬化24例。HCV感染的诊断以血清抗-HCV或HCV RNA阳性为依据,其中抗-HCV阳性34例,HCV RNA阳性29例,抗-HCV和HCV RNA两者均阳性44例。所有病例均经肝穿刺获取肝组织,经福尔马林固定,石蜡包埋后制成切片备检。

  二、检测方法

  HCV-NS3和HCV-NS5均采用双重过氧化物酶抗过氧化物酶复合物法(PAP)检测。抗体均购自北京邦定公司。用直接酶标法检测肝组织中HCV(HCAg),酶标抗-HCV购自北京华美公司,按照使用说明书进行操作。

  结 果

  一、肝组织中HCV抗原检出情况

  采用酶标抗-HCV、鼠抗-HCV-NS3和HCV-NS5抗体均从丙肝患者肝组织中检出了相应抗原,检出率存在较大差别,HCV-NS5检出率较高,HCV-NS3和HCAg检出率较低。各项检测指标的检出率在不同临床类型之间无明显差异(表1)。

表1 107例丙肝患者肝组织HCV抗原检出情况

组 别
 检测例数
 HCV-NS3(+)
 HCAg(+) HCV-NS5(+)
例数
 阳性率

  (%)
 例数
 阳性率

  (%)
 例数
 阳性率

  (%)
 
急性肝炎 19 4 21.1 3 15.8 5 26.3
慢性肝炎 64 24 37.5 19 29.7 34 53.1
肝硬化 24 13 54.2 8 33.3 17 70.8
合计 107 41 38.3 30 28.0 56 52.3

  二、HCV抗原在肝组织中的定位与分布

  所检出的各种抗原均位于肝细胞浆中,多呈均质细颗粒型,未见到细胞核着色。阳性程度(阳性细胞多少及着色强度)以HCV-NS5最强,HCAg显色次之,HCV-NS3较弱。阳性细胞多呈散在分布;少数表现为较多阳性细胞呈弥漫性分布于肝小叶中或阳性细胞呈簇状分布。HCV-NS5以弥漫性分布为主。大多数HCV抗原阳性肝组织显示两种抗原阳性,部分肝组织切片表现为单一抗原阳性(HCV-NS5为多)。41例的HCAg阳性组织,再用两种单克隆抗体检测,多表现为1种或2种抗原阳性,HCV-NS3的表达与炎症灶之间无明显解剖学关系,但常可见HCV-NS5阳性细胞位于坏死灶内或坏死灶旁,并且在坏死灶周围有淋巴细胞浸润。讨 论

  关于肝炎组织中HCV抗原的检测,以往文献报道多采用多克隆抗-HCV进行HCV感染的免疫组织化学研究[1,2],该方法简便,特异性也强,但检出率低,而且还不能区分所检测抗原的成分,意义较小。我们采用多克隆抗-HCV、单克隆抗-HCV-NS3和单克隆抗-HCV-NS5从丙肝患者肝组织中成功地检出相应抗原,检出率分别为38.3%、28.0%和52.3%。抗原定位于肝细胞浆内,未见细胞核着色。阳性细胞呈散在、簇状或弥漫性分布。

  本研究中采用酶标抗-HCV检测呈阳性的41份肝组织中,再应用单克隆抗-HCV-NS3和抗-HCV-NS5检测,均表现为1种或2种抗原阳性。从HCV-NS3和HCV-NS5的平行检测结果看出,HCV在肝细胞中各抗原表达水平不一致,HCV-NS5表达较多,而HCV-NS3表达则较少。这与Naoki[3]、赵西平等[4]和Domenico等[5]的研究结果一致。


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