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精制抗蛇毒血清制造及检定规程

来源:中国生物制品规程 作者: 2006-1-16
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摘要: 精制抗蛇毒血清制造及检定规程 本品系蛇毒或脱毒蛇毒免疫马的血浆,经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制成的抗蛇毒球蛋白制剂,能中和相应蛇毒,用于治疗被相应毒蛇咬伤之患者。1 用于制造精制抗蛇毒血清的血浆应符合附录1《抗蛇毒血清生产用马匹免疫方法》的规定。4 半成品检定 由制造部位进行理化检定、无菌试验、安全试验、......


精制抗蛇毒血清制造及检定规程

  本品系蛇毒或脱毒蛇毒免疫马的血浆,经胃酶消化后用硫酸铵盐析法制成的抗蛇毒球蛋白制剂,能中和相应蛇毒,用于治疗被相应毒蛇咬伤之患者。

  1 制造

  1.1 对血浆的要求

  1.1.1 用于制造精制抗蛇毒血清的血浆应符合附录1《抗蛇毒血清生产用马匹免疫方法》的规定。

  1.1.2对血浆效价的最低要求如下:

血浆种类 每瓶血浆效价(U/ml)
蝮蛇 150
五步蛇 50
银环蛇 200
眼镜蛇 12

  1.2 制造程序

  按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.2项进行。

  1.3 对制造工艺的要求及规定

  按《精制抗毒素制造及检定规程》中1.3项进行。

  1.4 半成品检定

  由制造部位进行理化检定、无菌试验、安全试验、热原质试验、类A血型物质测定及效力试验。热原质试验、类A血型物质测定及效力试验可与质量检定部门会同进行。检定方法及要求同成品检定。

  2 成品检定

  由质量检定部门进行全面检定,半成品已会同检定的项目可抽检。

  2.1 鉴别试验

  按《精制抗毒素制造及检定规程》2.1项进行。

  2.2 理化检定

  按《精制抗毒素制造及检定规程》中2.2项进行

  2.3 无菌试验

  按《生物制品无菌试验规程》进行。

  2.4 安全试验

  按《精制抗毒素制造及检定规程》2.4项进行。

  2.5 热原质试验

  按《生物制品热原质试验规程》进行。注射剂量为3ml/kg。判定标准按该规程4.1项要求进行。

  2.6 类A血型物质测定

  按《精制抗毒素制造及检定规程》2.6项进行。

  2.7 效价测定

  2.7.1 效价测定方法见附录2。

  2.7.2对各种抗蛇毒血清成品的最低效价要求如下:

抗血清种类 血清效价(U/ml)
蝮蛇 500
五步蛇 180
银环蛇 800
眼镜蛇 100

  3 保存与效期

  保存在2~8℃。自效价测定合格之日起,液体血清效期为3年,冻干血清效期为5年。

  附录1 抗蛇毒血清生产用马匹免疫方法

  1 马匹

  1.1 用于免疫采血之马匹必须符合《生物制品生产用马匹检疫及管理规程》的规定。

  1.2 马匹开始免疫前可做破伤风预防注射。

  1.3抗蛇毒血清生产用马匹,如解剖确诊为蛇毒中毒死亡者,应将尸体焚毁或深埋。

  2 抗原与佐剂

  2.1 免疫用蛇毒抗原选用蛇毒或脱毒蛇毒。

  2.2 用作免疫之蛇毒毒素必须经除菌处理。

  2.3 蛇毒应于2~8℃真空干燥保存。免疫抗原为配制稀释成一定浓度的蛇毒液。

  2.4凡接触蛇毒之用具,用前用后都应煮沸消毒,手有创伤者,操作时应有保护措施。

  2.5 免疫用佐剂应符合《精制抗毒素制造及检定规程》附录1中的有关要求。

  3 免疫与采血

  3.1 马匹免疫采血按《抗毒素生产马匹免疫方法》中的要求及规定进行。

  3.2 基础免疫、超免疫

  根据基础免疫情况,制定超免疫计划。免疫注射量应逐渐递增,可视注射反应而定。

  3.3 采血

  经试血效力试验合格之马匹可进行采血,其血清的效价不得低于下列要求。分离之血浆加适宜防腐剂(如0.5%苯酚)。

抗血清种类 采血要求最低效价(U/ml)
抗蝮蛇毒 180
抗五步蛇毒 60
抗银环蛇毒 300
抗眼镜蛇毒 15

  4 效价测定

  效价测定方法见附录2。

  附录2 抗蛇毒血清效价测定方法(小白鼠试验法)

  1 试剂

  1.1 标准抗蛇毒血清

  由中国药品生物制品检定所分发。标准抗蛇毒血清应保存于2~8℃。

  1.2 蛇毒

  由检定所分发。试验用的蛇毒须以检定所分发的标准抗蛇毒血清准确标定其试验量(蝮蛇、眼镜蛇及银环蛇1个L+,五步蛇2个L+)。使用干毒时,须以精确的分析天平称取,每次称取量不得少于5mg,溶解后应在3天内(保存于2~8℃)用完。干毒应封存于装有干燥剂的真空器皿中。亦可将干毒制成液体甘油蛇毒,即干毒溶解液与中性甘油(经116℃10分钟灭菌)等量混合,每ml至少含50个试验量,保存于2~8℃暗处。

  1.3 稀释液

  硼酸盐缓冲盐水,灭菌后pH应为7.0~7.4。配方为:

  氯化钠8.5g

  硼酸 4.5g

  硼砂0.5g

  加蒸馏水至1000ml,过滤。

  2 用具

  吸管、容量瓶、注射器应经标化。吸管、试管、容量瓶应洁净干燥,其他用具应灭菌。

  3 试验动物

  体重18~20g健康小白鼠。

  4 试验方法

  4.1 稀释标准抗蛇毒血清

  用稀释液稀释标准抗蛇毒血清使每ml含抗银环蛇、眼镜蛇或抗蝮蛇毒血清5U、或抗五步蛇毒血清10U,即与5个相应蛇毒试验量混合后每0.4ml注射量中含1U或2U。

  4.2 稀释蛇毒

  用稀释液稀释蛇毒,使其5个试验量不超过0.8ml,在与抗蛇毒血清混合时补加稀释液至2ml,即每0.4ml注射量中含1个试验量。

  4.3 稀释待检抗蛇毒血清

  用稀释液将待检抭蛇毒清稀释成数个稀释度,使每ml抗蝮蛇、眼镜蛇或银环蛇毒血清约含5U或其上下:抗五步蛇毒血清约含10U或其上下。各稀释度间隔5%~10%。

  4.4 混合

  4.4.1 待检组

  定量吸取不同稀释度之待检抗蛇毒血清各1ml,分别装入小试管中,每管加入5个试验量与待检抗蛇毒血清相应的稀释蛇毒液,补加稀释液至2ml,混合均匀,加塞,置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

  4.4.2 对照组

  按下表定量吸取已稀释之待检抗蛇毒血清相应的标准抗蛇毒血清,分别装入小试管中:

  对照①
  对照②

  标准抗眼镜蛇毒血清 1ml 1.2ml

  每管加入5个试验量之相应稀释蛇毒液,补加稀释液至2ml,混合均匀,加塞,置37℃结合45分钟后立即注射小白鼠。

  4.5 注射

  每个稀释度的待检抗蛇毒血清、对照①及对照②各注射小白习4只,每只腹腔注射0.4ml。应注意勿使注射液流出。

  4.6 观察

  试验小白鼠每日观察1次,并记录发病及死亡情况,抗银环蛇毒血清及抗五步蛇毒血清之试验小白鼠观察48小时,抗腹蛇毒血清及抗眼镜蛇毒血清之试验小白鼠观察72小时。

  4.7 结果判定

  对照①小白鼠死亡50%以上,对照②小白鼠应比对照①死亡晚或不死亡。待检抗蛇毒血清之效价应以与对照①小白鼠同时死亡之最高稀释度判定。

精制抗蛇毒血清使用说明书

  本品系用蛇毒免疫马匹后由马血浆精制而成,供治疗蛇咬伤者之用,其中蝮蛇抗血清对竹叶青和烙铁头咬伤亦有疗效。咬伤后,应迅速注射本品,愈早愈好。

  本品为无色或淡黄色的澄明液体,含防腐剂,久置可析出少量能摇散的沉淀。

  用法

  1.注射途径:通常采用静脉注射,也可做肌内或皮下注射。

  2.剂量:一般蝮蛇咬伤注射抗蝮蛇毒血清6000U;五步蛇咬伤注射抗五步蛇毒血清8000U;银环蛇或眼镜蛇咬伤注射抗银环蛇毒血清10000U或抗眼镜蛇毒血清2000U。以上剂量约可中和一条相应蛇的排毒量。视病情可酌量增减。

  3.儿童用量应与成人相等,不应减少。

  4.注射前必须先做过敏试验,阴性者才可全量注射。

  过敏试验方法

  取0.1ml抗血清加1.9ml氯化钠注射液,好20倍稀释。在前臂掌侧皮内注射0.1ml,经20~30分钟,注射部位皮丘在2cm以内,且皮丘周围无红晕及蜘蛛足者为阴性,可直接注射。若阳性可疑者,预先注射扑尔敏10mg(儿童剂量根据体重酌减),15分钟后再注射本品。若阳性者应采用脱敏注射法。

  脱敏注射法

  用氯化钠注射液将抗血清稀释20倍。分数次做皮下注射,每次观察10~20分钟,第1次注射0.4ml。如无反应,可酌情增量注射。注射观察3次以上,无异常反应者,即可做静脉、肌内或皮下注射。注射前将制品在37℃水浴加温数分钟。注射时速度应慢,开始每分钟不超过1ml,以后亦不宜超过4ml。注射时,如有异常反应,应立即停止注射。

  注意事项

  1.遇有血清过敏反应,即肌内注射扑尔敏。必要时,应用地塞米松5mg加入25%(或50%)葡萄糖注射液20ml中静脉注射或氢化可的松琥珀酸钠135mg或氢化可的松100mg加入25%(或50%)葡萄糖注射液40ml中静脉注射,亦可静脉滴注。

  2.对咬伤者不论是否毒蛇咬伤,遇有伤口污染较明显者,应同时注射破伤风抗毒素1500~3000U。

  保存

  保存于2~8℃暗处。


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