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冻干黄热活疫苗制造及检定规程

来源:中国生物制品规程 作者: 2006-1-16
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摘要: 冻干黄热活疫苗制造及检定规程 本品系用减毒的黄热病毒17D株接种鸡胚,经研磨、离心,取上清液冻干制成。2 毒种检定 1。1 无菌试验 按《生物制品无菌试验规程》进行。2 纯毒试验 用已知黄热病毒免疫血清做中和试验,证明其为黄热病毒。...


冻干黄热活疫苗制造及检定规程

  本品系用减毒的黄热病毒17D株接种鸡胚,经研磨、离心,取上清液冻干制成。专供进入或经过黄热流行地区的人员预防黄热之用。

  1 毒种

  1.1 毒种来源

  减毒黄热病毒17D株。

  1.2 毒种检定

  1.2.1 无菌试验

  按《生物制品无菌试验规程》进行。

  1.2.2 纯毒试验

  用已知黄热病毒免疫血清做中和试验,证明其为黄热病毒。

  1.2.3 猴体安全及效力试验

  取冻干黄热17D毒种,加无菌生理盐水恢复其原液量,接种无黄热病毒中和抗体之恒河猴10只,每只脑内注射0.25ml(50000个小白鼠LD50)。注射后第2、4、6日各采血1次,分离血清,分别做10倍系列稀释。以原血清及10-1~10-3各稀释度的血清分别脑内注射体重10~12g小白鼠6只,每只0.03ml,观察21天,检查病毒量,LD50均不得超过Log2(4天以内死亡的小白鼠不计算在内)。猴子经注射后2~4周,再采血1次,分离血清,做中和抗体测定。10只猴中至少要有9只血清表现阳性中和反应。在1个月的观察期中,发现脑炎症状或因而死亡者不得超过1只猴。

  1.3 毒种保存

  原毒种和生产毒种批均应冻干后真空封口,保存于-70℃以下。

  1.4 毒种传代和生产毒种的制备

  取毒种3支,启开安瓿后立即以稀释液(不应含有任何人体蛋白和外源血清或抗体)溶化。待全部溶化后接种于7日龄鸡胚卵黄囊,每胚0.2ml。分2组进行,每组不得少于10胚,置37.5~38℃培育。70~80小时按组收取活存鸡胚,每组不得少于4胚。去眼后分组混合研磨,加稀释液做成悬液,经2000r/min离心10分钟,吸取上清液,在鸡胚中传代,并抽样按《生物制品无菌试验规程》进行无菌试验。按同法连续传递2代,传代时可不等无菌试验结果,第3代毒种的鸡胚收获后,吸取容器内液体做无菌试验(方法同上),并将鸡胚冻存于-40℃以下。将无菌试验阴性之鸡胚取出融化。按每胚加入1ml稀释液研磨,经2000r/min离心10分钟,吸取上清液,加入稀释液稀释5倍后置冰浴中待用。同时做毒力滴定。此代即为生产毒种。

  2 疫苗制造

  2.1 接种鸡胚

  用7日龄鸡胚,每胚接种适当稀释度毒种液0.1~0.2ml于卵黄囊,接种后滴蜡封口。

  2.2 培育

  接种后37.5~38℃培育,70~80小时开始收获。

  2.3 收获

  收获时剔去死胚,分组收获活存鸡胚,去眼,装入大管中,逐管吸取管内液体做无菌试验,在操作过程中盛鸡胚之大管应置冰浴中保冷,收获完毕置-40℃冻存。

  2.4 研磨、离心

  2.4.1 研磨

  剔除洒菌鸡胚,将冰冻鸡胚大管置冷水中融化,倒入研磨桶内,按每胚1ml加入灭菌双蒸水,用电动研磨机8000r/min研磨3分钟。

  2.4.2 离心,收取上清液

  将研磨后的鸡胚悬液以减压虹吸法分装于500ml瓶中,塞以胶塞,用2000r/min离心30分钟。离心应在2~5℃进行。

  收取上清液,每批装一个球瓶,换以胶塞,保存在冰浴中。

  2.5 半成品检定

  2.5.1 无菌试验

  按《生物制品无菌试验规程》进行

  2.5.2 冻干前病毒滴定

  吸取球瓶中样品,作10倍系列稀释。取10-1~10-6之病毒液,每个稀释度用体重10~12g小白鼠6只,每只脑内注射0.03ml,接种部位忌用碘酒消毒,观察21天,计算LD50。

  2.6 分装

  疫苗保存在冰浴中进行分装,每安瓿分装量为0.5ml(10人份)。分装后将盛安瓿之金属盒放入-40~-50℃预冻2小时。

  2.7 冻干

  全部冻干过程为15~17小时,最后5小时升温20~25℃,最高不得超过25℃。冻干后安瓿真空封口。

  3 成品检定

  3.1 物理检查

  外观为略带粉红色的疏松体,水分不应超过3%(g/g),加入稀释液应迅速溶解。

  3.2无菌试验

  按《生物制品无菌试验规程》进行。

  3.3 猴体安全及效力试验

  方法及要求见1.2.3项,如生产毒种做过猴体安全及效力试验则疫苗可免做。

  3.4 豚鼠安全试验

  按原分装量加入生理盐水溶解疫苗,用体重300~500g豚鼠2只,试验前2~3天每天量体温、称体重。然后每只腹腔注射0.5ml,观察7天,每天量体温,应无病症发生。如2只豚鼠均有显著反应(体温超过40℃,体重减轻)或死亡,则该批疫苗应废弃;如有1只豚鼠有症症发生,可再用3只豚鼠重试,重试中如有2只以上豚鼠发病时,判为不合格,制品应废弃;如有1只发病,则再重试,仍有发病则判为不合格,制品应废弃。

  3.5 病毒滴定

  同半成品检定。每只小白鼠脑内注射0.03ml。病毒滴度应≥3.66LogLD50。

  3.6 稳定性试验

  由每批疫苗成品取3安瓿,置37℃2周,滴度下降不应超过1Log。

  3.7 鉴别试验

  每亚批成品应按1.2.2项进行鉴别试验。

  3.8 稀释液

  氯化钠注射液,其质量应符合《中国药典》规定。

  4 保存与效期

  应保存于-20℃,自干燥之日起效期为1年半,如保存于2~8℃,效期为6个月。

冻干黄热活疫苗使用说明书

  本品系用减毒的黄热病毒17D株接种鸡胚,经研磨、离心,取上清液冻干制成,为略带粉红色的疏松体。用于预防黄热。

  接种对象

  进入或经过黄热流行地区的人员。

  用法

  1.按标签标明的疫苗量,加10倍量的氯化钠注射液,混合均匀后方可进行接种。

  2.于上臂外侧三角肌附着处,皮肤经酒精消毒后皮下注射0.5ml,一次。

  禁忌

  1.发热及急性疾病患者。

  2.严重心、肝、肾等慢性病患者。

  3.有过敏史,尤其对鸡蛋过敏者。

  4.孕妇。

  注意事项

  1.启开安瓿和注射时切勿使消毒剂接触疫苗。

  2.疫苗溶解不好,安瓿有裂纹,标签不清或过期失效者均不得使用。

  3.安瓿启开后,疫苗应在1小时内用完。

  保存

  应保存于2~8℃避光处或-20℃。


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