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伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗制造及检定规程

来源:中国生物制品规程 作者: 2006-1-15
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摘要: 伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗制造及检定规程 本品系用伤寒、副伤寒甲、乙菌分别培育,取菌苔制成悬液经甲醛杀菌,以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成每ml含伤寒菌1。5亿、副伤寒甲、乙菌各0。用于预防伤寒及副伤寒甲、乙。1菌种来源 制造伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗用的菌种及检定菌种用的各种诊断血清,应由中国药品生物制品检定......


伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗制造及检定规程

  本品系用伤寒、副伤寒甲、乙菌分别培育,取菌苔制成悬液经甲醛杀菌,以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成每ml含伤寒菌1.5亿、副伤寒甲、乙菌各0.75亿制成。用于预防伤寒及副伤寒甲、乙。

  1 菌种

  1.1菌种来源

  制造伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗用的菌种及检定菌种用的各种诊断血清,应由中国药品生物制品检定所分发或经同意。

  1.2 菌种检定

  检定菌种可用pH7.2~7.4的肉汤琼脂、马丁琼脂或其他适宜的培养基。

  1.2.1 培养特性

  各菌株应具有典型的形态、培养及生化特性。

  1.2.2 血清凝集试验

  用37℃培育18~20小时的培养物以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成含菌6亿/ml,与相应的伤寒、副伤寒甲、乙菌诊断血清做定量凝集试验,摇匀后放37℃过夜,以肉眼可见到凝集(+)之血清最高稀释度为凝集反应之效价,凝集价不应低于血清原效价之半。伤寒菌种加用伤寒Vi及O血清做凝集试验,应与Vi血清有凝集,与O血清不凝集,或仅有较低凝集。

  1.2.3 毒力试验

  用37℃培育12~16小时的琼脂培养物以生理盐水稀释为下列浓度的菌液:

  伤寒、副伤寒乙菌种:3亿/ml、1.5亿/ml及0.75/ml。

  副伤寒甲菌种;15亿/ml、7.5亿/ml及3.75亿/ml。

  根据菌种毒力情况稀释度可作更改,也可增加稀释度。

  每一稀释度的菌悬液腹腔注射体重14~16g之小白鼠,至少5只,每只0.5ml,观察3天,使小白鼠于感染后3天内全部死亡的最小剂量为1个致死量(LD),伤寒、副伤寒乙菌种1LD应不超过1.5亿菌,副伤寒甲不超过7.5亿菌。

  1.2.4 毒性试验

  用37℃培育18~20小时之琼脂培养物混悬于磷酸盐缓冲生理盐水内,伤寒及副伤寒甲菌液加温56℃1小时,副伤寒乙菌液加温58℃1小时杀菌(或其他方法杀菌),不加防腐剂。杀菌试验合格后稀释为每ml含菌60、30及15亿等3个浓度,每一浓度的菌悬液以0.5ml腹腔注射体重15~18g小白鼠5只,观察3天,注射7.5亿菌之小白鼠应全部生存,注射15亿菌之5只小白鼠可有3只死亡。

  1.2.5 免疫力试验

  用加温杀菌(或用其他方法杀菌)不加防腐剂的菌液稀释成如下的浓度:

  伤寒及副伤寒乙菌液:2.5亿/ml。

  副伤寒甲菌液:5亿/ml。

  每一菌液免疫体重14~16g小白鼠至少30只,每只皮下注射上述浓度的菌液0.5ml。注射2次,间隔7天,末次免疫后9~11天进行毒菌攻击。每种死菌菌液免疫之小白鼠各腹腔注射1LD的相应毒菌(含于0.5ml中),同时应用同批饲养或体重与免疫组相同的小白鼠3组,每组至少5只作对照,分别于腹腔注射2、1及1/2LD的毒菌(各含于0.5ml中),观察3天。对照组小白鼠感染2及1LD者应全部死亡,感染1/2LD者要有部分死亡。伤寒、副伤寒乙菌液免疫组至少保护70%小白鼠活存,副伤寒甲菌液免疫组至少保护60%小白鼠活存,则免疫力试验为合格。

  免疫力试验也可用LD50法判定结果:

  用加温杀菌(或用其他方法杀菌)不加防腐剂的菌液稀释成如下的浓度:

  伤寒及副伤寒乙菌液:2.5亿/ml。

  副伤寒甲菌液:5亿/ml。

  每一菌液免疫体重14~16g之小白鼠至少30只,每只皮下注射上述浓度的菌液0.5ml,注射2次,间隔7天,末次免疫后9~11天,用培养12~16小时的伤寒、副伤寒甲或乙菌株之菌苔以pH7.2~7.4的肉汤及生理盐水等稀释至适当的浓度进行攻击。免疫组小白鼠应感染100个LD50以上的毒菌。同时应用同批饲养或体重与免疫组相同的小白鼠分为3~4组,每组至少5只,分别感染不同剂量毒菌作对照。免疫组及地照组分别腹腔注射0.5ml,观察3天,计算LD50。免疫组至少应保护70%小白鼠存活。

  在做免疫力试验时,应以参考菌苗作对照。

  1.2.6 抗原性试验

  选体重2kg左右之健康家兔至少3只,用免疫力试验所用之菌液静脉注射3次每次0.5ml,第1次注射7亿菌,第2次14亿菌,第3次21亿菌,每次间隔7天。末次注射后10~14天采血做定量凝集试验测定效价。伤寒菌免疫的血清对免疫菌效价应不低于1∶12800,副伤寒甲、乙效价不低于1∶6400,2/3家兔血清之凝集价达上述要求即为合格。

  1.3 菌种保存

  菌种应冻干保存,冻干菌种保存于2~8℃。

  菌种冻干后应抽取样品按1.2项进行检查,合格后可使用3年。以后每次生产前必须检查全部特性一次,合格者可继续使用2年。

  2 菌苗制造

  制造伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗所用的每一菌种选用2个菌株。

  2.1 菌种

  冻干菌种启开后应检查菌形、纯度及进行玻片凝集试验(伤寒菌加用Vi血清),合格后即可使用。每启开1支冻干菌种用于生产不应超过6代。

  2.2 制造用培养基

  用pH7.2~7.4的马丁琼脂或肉汤琼脂或其他适宜的培养基。

  2.3 原液制造

  2.3.1 接种

  采用涂种,接种后置37℃培育18~14小时。

  2.3.2 采集

  采集前逐瓶检查,有杂菌者废弃。刮取菌苔混悬于磷酸盐缓冲生理盐水中。

  2.3.3 纯菌试验

  原液采集后应逐瓶取样接种琼脂斜面1管,于37℃培育3天,24~26℃1天,有杂菌生长应废弃。

  2.3.4 杀菌

  原液用甲醛溶液杀菌,各种原液加入甲醛溶液浓度如下:

  伤寒菌原液不超过1.1%±0.1%(ml /ml)。

  副伤寒甲菌原液不超过1.4%±0.1%(ml /ml)。

  副伤寒乙菌原液不超过1.8%±0.2%(ml /ml)。

  加杀菌剂后的原液应放在37℃,不得超过7天,以后保存于2~8℃。

  2.3.5无菌试验

  纯菌试验合格的原液,应取样接种不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基及普通琼脂斜面各1管,放37℃培育5天有本菌生长,可加倍量复试一次;有杂菌生长应废弃。

  2.3.6 原液合并

  无菌试验合格之原液,按不同菌株或不同制造日期分别过滤合并,合并后应加不超过0.5%(g /ml)的苯酚或其他适宜之防腐剂,保存于2~8℃。

  2.4 原液检定

  2.4.1 镜检

  菌形应正常,无杂菌。

  2.4.2 凝集试验

  原液与相应血清进行凝集试验,其凝集效价不应低于血清原效价之半。

  2.4.3无菌试验

  按《生物制品无菌试验规程》进行。

  2.4.4 浓度测定

  应按中国细菌浊度标准与质量检定部门会同测定浓度。

  2.4.5 免疫力试验

  原液于无菌试验合格后与质量检定部门会同进行。抽验批数应不少于生产批数的1/5。方法同1.2.5项,唯所用小白鼠每组至少15只。对伤寒或副伤寒甲乙毒菌之攻击,均应保护60%小白鼠活存为合格。

  2.5 原液保存

  原液应保存于2~8℃。原液自采集之日起至用于菌苗稀释时不得少于4个月,保存效期自采集之日起为2年半。

  2.6 菌苗稀释

  2.6.1 原液配合

  稀释前应先将不同菌种所制之原液按比例配合。每一种菌所加的菌数与应加菌数在总菌数不变的原则下,允许两种菌之间在20%的范围内互有增减;同一种菌不同菌株之原液按等量混合,但每个菌株所加的菌数与应加菌数在总菌数不变的原则下,允许两个菌株之间在40%范围内互有增减。

  2.6.2 菌苗稀释

  稀释菌苗用含0.25%~0.5%(g /ml)苯酚或其他适宜的防腐剂之磷酸盐缓冲生理盐水。

  2.6.3 苗菌浓度

  菌苗每ml含伤寒菌1.5亿,副伤寒甲及副伤寒乙菌各0.75亿。

  2.7 菌苗分批

  同组配合的原液用同批稀释液在同一日稀释的种瓶菌苗为1批。大罐稀释时应按大罐分批,并按分装机分为亚批。

  2.8 检定

  稀释后每批应逐瓶抽样进行无菌试验及测定防腐剂含量(大罐稀释时除外)。

  2.9 分装

  分装后应每亚批抽样送质量检定部门进行成品检定。

  3 成品检定

  3.1物理化学检查

  菌苗应为乳白色悬液,pH值为6.8~7.4,不应有摇不散的菌块或异物。苯酚含量应为0.25%~0.5%(g /ml)。

  3.2 菌形及纯度

  染色镜检,应为革兰氏阴性杆菌。至少观察10个视野,平均每个视野内不得有10个以上非典型菌(线状、粗大或染色可疑杆菌),并不应有杂菌。

  3.3 无菌试验

  按《生物制品无菌试验规程》进行。

  3.4 安全试验

  3.4.1 毒性试验

  用体重18~20g之健康小白鼠5只,每只腹腔注射菌苗0.5ml,或用体重350~450g之健康豚鼠2只,腹腔注射菌苗1.5ml,观察7日,应无死亡。

  3.4.2 防腐剂试验

  用体重18~20g之健康小白鼠2只,每只皮下注射菌苗0.5ml,用苯酚作防腐剂的菌苗注射的小白鼠可发生战栗症状,但不应超过半小时,观察7日不得有局部脓肿或死亡。

  4 保存与效期

  应保存于2~8℃。自稀释之日起效期为1年半。如原液保存超过1年稀释,应相应缩短效期(自原液采集之日起总效期不得超过2年半)。

伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗使用说明书

  本品系用伤寒、副伤寒甲、乙菌分别培育,取菌苔制成悬液经甲醛杀菌,以磷酸盐缓冲生理盐水稀释制成。用于预防伤寒、副伤寒甲、乙。

  本品为乳白色的混悬液,含苯酚防腐剂,不应含有异物或摇不散的凝块。

  接种对象

  重点使用于部位、港口、铁路沿线工地的工作人员,下水道、粪便、垃圾处理人员,饮食行业、医务防疫人员及水上居民,或有本病流行地区的人群。

  用法

  1.于上臂外侧三角肌附着处皮肤经消毒后皮下注射。

  2.初次注射本菌苗者,需注射3次,每次间隔7~10天。注射剂量如下:

  1~6周岁:第1针0.2ml,第2针0.3ml,第3针0.3ml。

  6周岁以上~14周岁:第1针0.3ml,第2针0.5ml,第3针0.5ml。

  14周岁以上:第1针0.5ml,第2针1.0ml,第3针1.0ml。

  加强注射剂量与第3针相同。

  禁忌

  1.发热,严重心脏病,高血压,肝、肾脏病及活动性结核

  2.孕妇,月经及哺乳期。

  3.有过敏反应病史者。

  注意事项

  1.用前摇匀。安瓿有裂纹,有异物、摇不散的凝块或曾经冻结者都不能使用。

  2.应备有1∶1000肾上腺素,以供偶有发生休克时急救之用。

  反应

  局部可出现红肿,有时全身有寒热或头痛

  保存

  保存于2~8℃暗处。


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