摘要：附录一 参考值 血脂参考值 血清总脂（TL） * 化学法 成人：4。69mmol/L * 酶法 0。7mmol/L ** 血清总胆固醇（TC） 化学法 2。47mmol/L（均值5。
摘要：第三节基因序列的突变分析 目前对于基因序列的突变分析国内外多采用直接测序方法，直观又准确。例如，1996年Sakai等报道了对高α脂蛋白血症患者CETP基因内含子10和内含子14片段序列的突变分析。其方法为：采取患者...
摘要：第二节DNA的序列测定 核酸的序列分析，即核酸一级结构的测定，是现代分子生物学中一项重要技术。目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977年）提出的双脱氧链终止法及Maxam和Gilbert（1977年）提出的化学降...
摘要：第二十四章DNA的克隆与序列测定 近20年来分子克隆技术的发展突飞猛进，重组DNA操作技术包括的范围不断扩大，DNA克隆的方法亦多种多样，特别是PCR技术的应用，以及RFLP、SSCP等技术的开展，使得DNA克隆技术的应用日...
摘要：第三节转基因小鼠模型与动脉粥样硬化 随着分子生物学的发展和脂代谢相关蛋白基因的克隆，序列测定及表达调控元件研究的深入，为探讨载脂蛋白及其他脂代谢相关蛋白和AS的关系，以期建立As TGM模型奠定了基础。现已...
摘要：第二节转基因小鼠的制备 在研究心血管疾病时，主要运用显微注射法、基因打靶或基因剔除等方法制备各种TGM模型。 1．显微注射法 Gordon等人首次成功地将含有HSV和SV40DNA片段的重组质粒DNA以显微注射法导入小鼠受精...
摘要：第二十三章转基因动物在动脉粥样硬化研究中的应用 转基因动物（transgenic animal）是指用实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定地整合并可以表达和传与后代的一类动物。自1980年Gordon等将猿猴病毒（SV4...
摘要：第六节血管细胞培养的鉴定 一、血管内皮细胞鉴定 在操作过程中，可能混入成纤维细胞平滑肌细胞。鉴定血管内皮细胞基础是根据他自身的形态、性质。内皮细胞有三个显著特点：①形态学呈单层铺路石样排列，如前所述。...
摘要：第五节动脉平滑肌细胞的培养 一、血管平滑肌细胞的培养 血管平滑肌细胞培养常用的方法有贴块法（explant）和酶解离法（enzyme disperse）。贴块法具有获得平滑肌细胞纯度高，量多，操作简便的优点。但用贴块法易使...
摘要：第四节血管壁细胞的培养和鉴定 动脉粥样硬化病灶主要涉及两类血管细胞即血管内皮细胞和中膜平滑肌细胞（SMC），本节主要就这两类细胞进行讨论，介绍一般培养和鉴定方法。 一、血管内皮细胞的培养方法和特性 人和动...
摘要：第二节动脉粥样硬化动物模型 一、常用动脉粥样硬化动物模型的比较 动脉粥样硬化模型所用的动物有鼠、兔、猪、狗、猴，依上述理想动物模型的要求最常用的是兔、猪和鼠。 表22-1 动脉粥样硬化模型的种类 动物种类...
摘要：第三节家族性高脂血症动物模型 家族性高胆固醇血症是由于遗传因素导致LDL受体（LDL-R）缺陷，从而引起LDL代谢障碍。 由于该病是LDL-R基因突变引发的疾病，所以很难用前述的方法制作成功动物模型，而是通过育种学和...
摘要：第二十二章动脉粥样硬化模型及细胞培养 第一节动物模型 制作动物模型是研究疾病发生、发展、治疗的一个重要方法和手段，动脉粥样硬化及血脂代谢紊乱（如高脂血症）的动物模型，随着对疾病研究的深入和发展自身也不...
摘要：第四节动脉血管壁免疫化学鉴定方法 免疫化学方法是利用抗原与其相应抗体具有特异结合的特性，用荧光素、酶、发光素、同位素、胶体金标记某种抗原的抗体，借助荧光显微镜、电镜、图像分析仪、同位素监测仪、分光光...
摘要：第三节动脉血管壁细胞间质成分的提取 一、胶原的提取 动脉血管壁胶原提取的基本方法是，首先除去凝血等其他杂质，由于胶原为杆状三螺旋结构，能耐受胃蛋白酶的作用，但是两端球蛋白结构能被胃蛋白酶水解。05mol/L...
摘要：第二节动脉血管壁细胞组分的提取 一、血管壁细胞提取 1．以无菌术取动脉，立即放入4℃、5%水解乳蛋白Hanks液中漂洗，除去凝血。 3．可先分开内皮细胞和平滑肌细胞，也可不区分两类细胞，将血管切成小块，放入2%胶...
摘要：第二十一章动脉血管壁的生化分析 动脉粥样硬化（AS）的发生发展从动脉血管壁病理形态上可分为脂纹、纤维斑块、复合病变三期。脂纹期外观为小圆形或卵圆形黄色斑点分布于血管内膜表面。病灶内平滑肌细胞呈弥散或灶...
摘要：第五节LDL-R基因突变的常用研究方法 一、Southern印迹法 Southern印迹法在鉴定LDL-R基因缺失突变中得到了广泛的应用。采用多种限制性内切酶切，以LDL-R基因片段和外显子特异性片段作探针，进行杂交，再放射自显影...
摘要：第四节LDL-R基因突变分析 自Shneider等于1992年成功地纯化出牛肾上腺的LDL-R基因，Yamamoto等1984年成功地分离和克隆出5。3kb受体基因的全cDNA，并制成探针后，FH患者LDL-R基因突变在NDA分子水平上的研究有了新进...
摘要：第三节抗体法检测LDL-R Felgines等在研究RICO鼠的肝载脂蛋白时报道了抗体法的应用。 用来源于牛肾皮质的LDL-R免疫兔，得到兔抗牛-LDL-R抗体，离心法收集纯化细胞膜蛋白，点样于硝化纤维膜上，于猝灭液中温育1h，以...
摘要：第二节3H-TdR掺入法与MTT比色法 Cutbert等发现缺乏内源性和外源性胆固醇时，培养于仅含微量LDL营养液中的人外围血淋巴细胞，其生长和增生均依赖与细胞膜表面LDL-R的存在，根据这一原理建立了3H-TdR（3H-thymidine...
摘要：第二十章低密度脂蛋白受体的检测 脂蛋白受体主要包括乳糜粒受体（CM-R）、极低密度脂蛋白受体（VLDL-R）、低密度脂蛋白受体（LDL-R）、高密度脂蛋白受体（HDL-R）和清道夫受体（scavenger receptor）等。脂蛋白受...
摘要：第四节载脂蛋白CⅢ基因型检测 载脂蛋白CⅢ基因位于11号染色体与载脂蛋白AⅠ-AⅣ形成一基因族，它位于载脂蛋白AⅠ下游，有三个内含子和四个外显子。目前对载脂蛋白CⅢ基因3'。用多聚酶链反应（PCR）扩增载脂蛋白...
摘要：第三节载脂蛋白B基因多态性的检测 ApoB是富含胆固醇和甘油三酯脂蛋白的重要组成成分，对脂质在人体转运、代谢、维持体内脂质水平的恒定起重要作用。大量临床资料及流行病学调查表明：血清ApoB及低密度脂蛋白（LDL...
摘要：第二节载脂蛋白E表型 ApoE是一种含有299个氨基酸的单链多肽糖蛋白（Mr34200），主要存在于CM、VLDL和HDL中。 1975年Utermann等将脱脂的VLDL进行IEF电泳时，首先提示ApoE多态性的存在。ApoE多态性的产生是由于其一...
摘要：第十九章载脂蛋白表型及基因型的检测 蛋白质多态性（protein polymorphism）指一种蛋白质存在多种不同的变型，这些变型的产生是由于同一基因位点内的突变，产生复等位基因，导致合成不同类型的蛋白质，人类蛋白质...
摘要：第五节免疫透行射比浊法 一、原理 当光线通过一个浑浊介质溶液时，由于溶液中存在混浊颗粒，光线被吸收一部分，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为透射比浊法。这一方法早于1959年Schul...
摘要：第四节免疫火箭电泳法 一、原理 定量的抗原加入到含有一定量的相应抗体的琼脂糖凝胶中，在电场作用下，引起抗原抗体的迁移和相互反应，当比例合适时形成肉眼可见的沉淀峰，由于电泳继续进行，样品孔不断有抗原移向...
摘要：第三节单向免疫扩散法 一、原理 将抗载脂蛋白血清均匀地混合于琼脂糖凝胶内，打孔，加样。8g加水至1000ml。3ml加水180。7ml）18。
摘要：第二节载脂蛋白抗体的制备 抗原免疫动物产生的抗体是血清γ-球蛋白的一部分。抗体的理化性质及结构与γ-球蛋白相近似。γ-球蛋白是一组结构相似，但又有差异的蛋白质，通称为免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig），按...
摘要：第十八章血清载脂蛋白的免疫测定 血浆中蛋白质种类繁多，对各种单一蛋白进行快速而又特异的定量。目前公认的方法是免疫测定法，即利用其特异的抗体，采用测定抗原抗体复合物的方式定量。血浆（清）中载脂蛋白是以...
摘要：第三节蛋白质浓度的测定 蛋白质溶液浓度测定方法有多种，下述几种方法可供选用。蛋白质浓度的测定，往往用于计算纯化方法的回收率的重要方法。 一、双缩脲法 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，至令...
摘要：3cm的琼脂糖凝胶，以玻璃板或薄膜为支持物，于凝胶正中打孔（直径0。当标本前沿泳动到距离凝胶端1cm左右，停止电泳，取出凝胶板，在凝胶板三孔之间开两条宽0。5cm长的凝胶槽。1与2孔之间的凝胶槽（A槽）中加入羊抗...
摘要：第十七章血清载脂蛋白分离纯化及其鉴定 研究载脂蛋白的前提条件是必须得到各种载脂蛋白的纯品，然而各种载脂蛋白的理化性质、分子量、氨基酸组成及其构象相差很大，因此必须根据各自的特性采用不同的方法进行分离...
摘要：第四节血清脂蛋白非电泳定量法 一、高密度脂蛋白胆固醇测定 血浆中脂蛋白有多种，测定其各自的含量对于了解机体正常及疾病过程中脂质代谢状况有重要的临床意义。HDL是一组不均一的脂蛋白颗粒，其胆固醇含量占血浆...
摘要：第二节血浆脂蛋白超速离心分离纯化法 一、超速离心法简介 为了研究，常需要得到脂蛋白纯品并进一步分离纯化载脂蛋白，迄至目前为止，采用密度梯度超速离心分离纯化各种脂蛋白仍是一种很好的方法。 超速离心法可分...
摘要：第三节血浆脂蛋白电泳分离定量法 一、血清脂蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳 （一）原理 以聚丙烯酰胺为支持介质，血清脂质用染料预染，使脂蛋白着色，经电泳后，一般可分出三条区带，即β-、前β-、α-脂蛋白。并可用光密...
摘要：第十六章血浆脂蛋白的分离纯化及定量 第一节脂蛋白分离的方法学评价 血浆脂蛋白和脂质测定是临床生化检验的常规测定项目，其临床意义主要是：①早期发现与诊断高脂蛋白血症。 血浆脂蛋白测定分离的常用方法有超速...
摘要：第四节非酯化脂肪酸测定 临床上将C10以上的脂肪酸称为游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）或非酯化脂肪酸（nonesterified fatty acid,NFFA），正常血清中含有油酸（18:1,W9）占54%，软脂酸（16：0）占34%，硬脂酸（...
摘要：第三节磷脂测定 磷脂（PL）并非单一的化合物，其分子内含有磷酸基的多种脂质，磷脂是这一类物质的总称。血中PL包括：①卵磷脂占60%和溶血卵磷脂占2%～10%。②磷脂酰乙醇胺等，占2%。③鞘磷脂，占20%。
