摘要：附录三全血细胞培养染色体技术常用试剂配制 一、国内实验室应用试剂配制 （一）培养液 （1）RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9。9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节pH7。1N稀盐酸液100ml。 （5）秋水仙素：...
摘要：附录二原位杂交组织化学常用试剂及处理 一、杂交前准备 （一）DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中，所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待处理水（蒸...
摘要：附录一免疫细胞化学常用试剂介绍 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某...
摘要：第五节“DNA指纹”与法医鉴定 1979年Teffreys根据β珠蛋白基因座位近旁出现的RFLP频率同测定的核苷酸总数，推算出人体基因组的遗传异质性约为每100个核苷酸中有一个差异。后在人体DNA随机片段的文库中分离出高度变...
摘要：第四节遗传病与肿瘤的基因诊断 从DNA水平上寻找确诊遗传病的指标或探讨遗传病和肿瘤的病因等方面，已取得很大成绩，这对产前诊断，早期确诊和突变基因携带者的检出等都有重要意义。 一、分离基因进行结构分析 利用...
摘要：第三节DNA重组实验中常用的技术 一、质粒DNA的提取及鉴定 （一）质粒DNA的提取及鉴定 1．收获细菌 （1）将2ml含相应抗生素的LB液体培养基加入到通气良好的15ml的试管中，接入一单菌落，于37℃剧烈振荡培养过夜。5...
摘要：第二节分子克隆载体 载体（vector）是指运载外源DNA有效进入受体细胞内的工具。载体同外源DNA在体外重组成DNA重组分子，在进入受体后形成一个复制子，即形成在细胞内能独自进行自我复制的遗传因子。因此，作为载体...
摘要：第九节其它链扩增技术及应用范围 一、免疫PCR 所谓免疫（Immune PCR）就是利用抗体与DNA特异结合来检测抗原，把抗原抗体反应与PCR联合应用而建立的一种抗原检测系统。 在免疫PCR中，一个中介分子同时具有与DNA、抗...
摘要：第二十三章DNA重组技术及其在基因诊断中的应用 第一节工具酶 基因工程的基本技术是人工进行基因的剪切、拼接、组合。基因是一段具有一定功能的DNA分子，要把不同基因的DNA线形分子片段准确地切出来，需要各种限制...
摘要：第七节PCR仪器的发展 PCR温度循环至关重要，PCR扩增仪各参数必须准确。自Perkin –Elmer Cetus公司第一台PCR扩增仪问世以来，现已有几十家不同的厂家在国内外生产和销售PCR扩增仪。在短短的几年间，扩增仪经过几代...
摘要：第八节PCR临床应用领域及特点 一、PCR应用特点 1．操作简便目前PCR技术采用耐高温Taq DNA聚合酶，并且在有电脑控制的DNA扩增仪中进行，使操作大为简化，一次加入的酶即可满足反应全过程。DNA扩增仪能自动迅速升降...
摘要：第六节样品处理与注意事项 一、样品处理 DNA是染色体的主要组成部分，是PCR的扩增模板。要进行PCR，研究DNA结构与功能或者用于诊断目的，首先必须从生物体内提取DNA。DNA往往以核蛋白形式存在，其分子量大（人的染...
摘要：第五节PCR各处应用模式 一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR 密码子具有兼并性，如表22-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时...
摘要：第四节影响PCR的主要因素 PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检...
摘要：第三节PCR操作范例及反应体系的组成 一、PCR操作范例 在一个典型的PCR反应体系中需加入：适宜的缓冲液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐热性多聚酶、Mg2+和两个合成的DNA引物。在末次循环后，样品仍需继续延伸3～5mi...
摘要：第二节PCR技术的原理 PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法，主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成：即在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板。如此反复进行，...
摘要：第二十二章聚合酶链反应（PCR）技术的发展和应用 第一节概述 聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR），又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique)，是一种对特定的DNA片段在...
摘要：第二节原位分子杂交技术在电镜水平的应用 自Gall和Pardue建立了原位杂交技术以来近20余年内，这一技术为基因的定位和表达、基因进化、发育生物学、肿瘤学、微生物学、病毒学、医学遗传学和遗传分析等领域研究提供...
摘要：第一节原位杂交技术在染色体铺片的应用 近年，不少科技工作者将原位杂交组织细胞化学技术（ISHH）应用于细胞分裂中期（Metaphase）和分裂间期（Interphase）的染色体铺片上，利用标记的核苷酸探针与之进行杂交，可...
摘要：第五节原位杂交免疫细胞化学技术的未来与展望 自1969年以来，我们高兴的看到原位杂交免疫细胞化学技术已从分子生物学的一个分支发展成为生命科学的有效的研究方法。在原位杂交免疫细胞化学发展过程中两个关键性的...
摘要：第二十一章原位杂交技术在染色体和电镜水平的应用 原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外，又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。
摘要：但在操作方法中应注意减少生物活性肽或蛋白的丢失，如在杂交后冲洗中适当减低漂洗温度。 一、同位素原位杂交组化与免疫组化PAP法的联合程序 （1）切片入PBS冲洗5min，最好是将切片漂洗于灭菌器皿中。1mol/L 甘氨酸...
摘要：第二节cRNA探针在原位杂交组织化学（ISHH）中的应用 Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交（见Cox et al 1984），核酸探针为单链的RNA分子，产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆（图20-2）。由于它是单链的...
摘要：第三节DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用 一、DNA探针的应用 虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针，但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针...
摘要：第一节原位杂交组织化学概述 一、核酸分子杂交技术 1961年Hall开拓了液相核酸杂交技术的研究，其基本原理是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键的形成，出现稳定的双链区，形成杂交的双...
摘要：第二十章原位杂交组织化学 原位杂交组织化学（In situ hybridization histochemistry, ISHH）是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，然...
摘要：第五节寡核苷酸探针的制备 利用寡核苷酸自动合成仪，可很简单地合成制备寡核苷酸探针（如15～50bp），这类探针具有以下优点：①短的探针比长探针杂交速度快，特异性强。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链...
摘要：第四节非放射性标记的核酸探针 放射性标记核酸探针在使用中的限制，促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展，在许多方面已代替放射性标记，推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术，即...
摘要：第二节核酸（基因）探针目的核酸的制备技术 一、特异性目的核酸（或基因）的制备 核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备： （1）直接分离基因核酸：即从基因组上直接用内切酶...
摘要：第三节放射性同位素标记核酸探针 最常用的同位素是α-32PdNTP,3HdNTP,及35SdNTP，多用缺品平移法、末端标记法，随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时，同时掺入标记的脱氧核苷酸，制出cD－NA标记探针...
摘要：第十九章核酸（基因）分子探针 第一节概述 从化学和生物学的意义上理解，探针是一种已知特异性的分子，它带有合适的标记物供反应后检测。探针和靶的相互反应如抗原-抗体、血凝素-碳水化合物、亲合素-生物素、受体...
摘要：第四节石蜡包埋组织的DNA提取及其应用 近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类基因组并非人们想像的那样稳定，诸如...
摘要：第二节DNA的变性与复性 一、DNA变性 DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变（如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等），称为DNA变性。加热、改变DNA溶...
摘要：第十八章核酸分子杂交技术概述 第一节核酸的分子结构 一、核酸的化学组成 组成核酸的元素有C、H、O、N、P等，其中N含量约为15%～16%，磷含量为9%～10%。由于核酸分子中的磷含量比较恒定，因此，核酸定量测定的经典...
摘要：第八节汗腺及汗腺肿瘤的免疫细胞化学特点 目前已有多种PcAb和McAb用于汗腺及汗腺肿瘤的研究，这些不同的抗体对汗腺的不同部位有特异性反应，主要用于探讨汗腺肿瘤的组织发生，分化特点以及诊断及鉴别诊断。同时也...
摘要：第七节真皮浸润细胞免疫表达 一、T淋巴细胞及其亚群的免疫表达 CD3（OKT3，Leu4）对T细胞特异，正常或肿瘤性B细胞不表达CD3。CD4RO（UCHL1）大多数T细胞和T细胞淋巴瘤呈阳性表达，能用于石蜡切片中。二者是常规筛...
摘要：第五节真皮与表皮交界 真皮与表皮交界不平。真皮乳头与表皮的突起部分（即表皮突）互相镶接。 一、基底膜带 （一）基底膜带（basement membrane zone, BMZ）的结构 基底膜带位于表皮真皮连结处，用PAS染色光学显微...
摘要：第五节真皮与表皮交界 真皮与表皮交界不平。真皮乳头与表皮的突起部分（即表皮突）互相镶接。 一、基底膜带 （一）基底膜带（basement membrane zone, BMZ）的结构 基底膜带位于表皮真皮连结处，用PAS染色光学显微...
摘要：第四节郎格罕细胞 郎格罕细胞（Langerhans cell, LC）是起源于骨髓和脾脏的一种树枝状细胞。LC主要存在于表皮和毛囊上皮内，通常位于表皮基底层上方。但真皮内，口腔、扁桃体、咽部、食管和阴道的粘膜中以及淋巴结...
摘要：第三节Merkel细胞 一、免疫细胞化学在Merkel细胞起源和功能认识中的作用 Merkel细胞系1975年Merkel在真皮交界处发现的一种比周围基底细胞淡染的细胞，此种细胞与神经髓鞘接触，认为是触觉细胞，并发现其能促进所有...
